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保存温度：-20℃保存，开封后根据单品储存条件储存，有效期两年。
产品内容：
产品说明：
1：酵母杂交筛库后，需要对筛选平板的菌落进行鉴定，由于酵母菌细胞壁以及拷贝数的影响，常规的菌P方法成功率不稳定。
2：本产品在酵母质粒提取KD2099，KD1343以及阳性克隆检测试剂盒KD2250的基础上，致力于解决酵母PCR成功率的问题，成功率可达100%，并免去玻璃珠震荡带来的人力损耗，一次可以处理192个样品，避免了摸索PCR条件带来的困扰。
3：一次提取实验，约耗时90～120min，可以得到192个样品的质粒DNA。所得产物可以满足PCR以及大肠杆菌转化实验。
4：本产品提供的酵母培养基为亮氨酸缺陷培养基，适用于pGADT7以及pGADT7-REC等leu筛选标记的质粒菌的扩繁。
实验准备：
1：产品储存：收到产品后，将96孔培养板(含SD-leu培养基)和提取液置于4℃冰箱；将酶解液置于-20℃冰箱；其他成分置于室温保存。
2：酵母菌扩繁：将96孔培养板(含SD-leu培养基)置于超净台中，将平板菌落分别接种于96孔中。盖好硅胶盖。于28～30℃培养至培养基变浑浊(OD值大于0.5，约需要培养12～24小时)。
提取步骤一(酶解)：
1.将酶解液置于37℃溶解(未用完的酶解液可以置于4℃保存一周，或者-20℃长期保存)。
2.离心沉淀96孔培养板培养所得酵母细胞(根据离心机转调整离心时间至酵母菌完全沉淀)。
3.在96孔培养板每孔加入200μL的酶解液重悬酵母菌沉淀，于37℃摇床(200-250rmp/min)孵育60min。
注意：30min时观察一下酵母菌是否沉淀，如沉淀震荡重悬。酶解时间可以延长(2-16h)，不影响提取结果。
提取步骤二(裂解)：
1.将提取液置于65℃水浴预热备用。
2.酶解完成后，每孔酶解产物中加入600μL的提取液(此时酶解产物会变澄清，总体积为800μL)。
提取步骤三(纯化)：
1.准备96孔质粒纯化板，置于96孔质粒回收板上(暂放，后续回收板用于质粒回收用)。
2.将裂解产物(每孔800μL)加入吸附柱中，将96孔质粒纯化板转移到用过的96孔培养板上(用于废液回收)，室温静置2min。
3.将96孔质粒纯化板(套于96孔培养板中)用最高转速离心(例如4000rmp/min离心5min)，弃穿透液。
4.将96孔质粒纯化板(套于96孔培养板中)每孔加入600μL洗涤液用最高转速离心(例如4000rmp/min离心5min)，弃穿透液。
5.将96孔质粒纯化板(套于96孔培养板中)用最高转速离心(例如4000rmp/min离心5min)，甩干残留液体。
提取步骤四(收集)：
1.此时将洗脱液置于65～85℃水浴预热。
2.将96孔质粒纯化板套于96孔质粒回收板上，每孔加入50μL的预热的洗脱液，室温静置3min。
3.将96孔质粒纯化板(套于96孔质粒回收板中)用最高转速离心(例如4000rmp/min离心5min)。
4.穿透液即为所得酵母质粒，取5μL用于50μL体系的PCR反应。取5～10μL用于大肠杆菌转化。
相关搜索：96孔酵母质粒小提试剂盒(用于PCR及大肠杆菌转化)，96 Well Plate for Yeast Plasmid Preps